Livning™Lip2000 Transfection Reagent(转染试剂）0.75ml

 Lipo2000与Lipofectamine2000一模一样是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点

适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。

质粒DNA的转染

   对大多数细胞来说，DNA(µg)与Lipo2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 以24孔板为例

贴壁细胞： 转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。

悬浮细胞：在准备DNA-Lip2000复合物之前，用500 µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。

2. 对每个转染样品，进行以下操作

a. 在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。

b. 在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制 成Lip2000 稀释液，室温静置5分钟。

c. 将DNA稀释液和Lip2000稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟， 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。

3. 将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。

4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。

5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加 入选择性培养基进行筛选。

质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化，一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lip2000 (µl) 的比例。