人外周血淋巴细胞分离液科研级

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2°C的条件下进行。首先根据样本量大小，分以下几种情况：

一、使用15ml离心管时：

情况A：血液样本量小于3ml时，实验方法如下：

1.取一支15ml离心管，加入3ml分离液。

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*分离效果）。

3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。*层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5.250g，离心10min。

6.弃上清。

7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8.250g，离心10min。

9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况B：血液样本量为3-6ml时，实验方法如下：

1.取一支15ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，450-650g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*分离效果，但*离心力*不超过1200g

）。

3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。*层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5.250g，离心10min。

6.弃上清。

7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8.250g，离心10min。

9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

二、使用50ml离心管时：

情况A：血液样本量为6-10ml时，实验方法如下：

1.取一支50ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-950g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，

血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件

需客户自行摸索，以达到*分离效果，但*离心力*不超过1200g）。

3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。*层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5.250g，离心10min。

6.弃上清。

7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8.250g，离心10min。

9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况B：血液样本量为10-20ml时，实验方法如下：

1.取一支50ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，50-1100g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*分离效果，但*离心力*不超过1200g）。

3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。*层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5.250g，离心10min。

6.弃上清。

7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8.250g，离心10min。

9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。