光镜HE染色
苏木精-伊红染色法(HE 染色法,hematoxylin-eosin staining)的原理为苏木精染色液能将细胞核染成蓝紫色,而伊红使细胞质成分染为红色。
首先用二甲苯(I)溶液进行脱蜡;5min后用二甲苯(Ⅱ)溶液再次进行脱蜡处理5min;脱蜡结束后用100%乙醇洗去二甲苯溶液;4min后改用95%的乙醇去除二甲苯溶液4min;再换浓度为80%的乙醇溶液再次洗去二甲苯溶液4min;最后改用浓度为75%的乙醇以便彻底洗去二甲苯溶液4min;结束后再用蒸馏水洗3min以便进行下步的染色;首先用苏木精溶液进行染色 10min;自来水洗后用1%盐酸水分化1s 至 10s ;再次用自来水洗蓝化1-2min 后再用0.5%伊红溶液染色1min;染色1min后进行脱水处理,依次运用浓度为80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、 95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ这五种不同乙醇溶液进行脱水;脱水过后先用二甲苯Ⅰ溶液浸染3-5min 后再用二甲苯Ⅱ溶液浸染3-5min;最后用中性树胶进行封片处理后就可以在显微镜下观察并拍照记录。
透射电子显微镜:
将心脏组织样品切成1mm3小块,用4%戊二醛固定过夜,在冷的1%四氧化锇中后固定,然后用0.1M磷酸缓冲液洗涤三次。随后,样品在酒精丙酮中系列脱水,并包埋在150目碳膜铜网及环氧树脂中。AO超薄切片机切片,用饱和醋酸铀和柠檬酸铅中进行双染色,染色后在透射电子显微镜下观察拍照(Hitachi)。